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    酶標儀選購的幾個(gè)關(guān)鍵參數!

    發(fā)布時(shí)間:2024-06-06 閱讀:67

    酶標儀選購的幾個(gè)關(guān)鍵參數!

    核心提示: 酶標儀作為一個(gè)常用的儀器,其基本功能不外乎一個(gè)比色測定,與比色計所不同的是在測定波長(cháng)范圍、吸光度范圍、光學(xué)系統、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟件功能等方面的差異,當然全自動(dòng)酶免疫分析系統還具有自動(dòng)洗板、溫育、加樣等功能。我們在選購酶標儀時(shí)應該考慮如下幾個(gè)關(guān)鍵參數:

    濾光系統


    酶標儀簡(jiǎn)單的是用濾光方式來(lái)劃分。一般來(lái)說(shuō),可以分為濾光片型和光柵型兩大類(lèi)。也有一些酶標儀里面同時(shí)裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時(shí)完成同一個(gè)檢測,本質(zhì)上還只是把濾片和光柵放在了一起,并沒(méi)有使兩者糅合而產(chǎn)生新的技術(shù)突破。

    光柵型濾光系統具有使用方便,可以進(jìn)行光譜掃描,靈活性等優(yōu)點(diǎn)。當然,濾光片系統也有其顯著(zhù)的優(yōu)勢,例如價(jià)格較為便宜,檢測靈敏度高,帶寬的可選擇性,可以進(jìn)行快速的濾光片切換,可配備有自動(dòng)加樣系統,在化學(xué)發(fā)光檢測中光線(xiàn)的透過(guò)率高。

    目前,濾光片系統應用廣,因為它可以讓實(shí)驗者完成多的試驗。


    測定波長(cháng)


    一般酶標儀的測定波長(cháng)在400~750nm或800nm之間,完全可以滿(mǎn)足ELISA的顯色測定。目前國內常見(jiàn)的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過(guò)氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過(guò)氧化氫溶液的存在下,經(jīng)HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當pH值為5.0左右時(shí),DAB在450nm波長(cháng)處有大吸收,當pH值降為L(cháng) 0時(shí),大吸收波長(cháng)移至492 nm,同時(shí)摩爾消光系數變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長(cháng)450nm處有大消光系數,如果HRP量少,H:O:和TMB過(guò)量時(shí),則形成藍色的陽(yáng)離子根。降低pH,即可使藍色的陽(yáng)離子根轉變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩定90min。因此,450nm和492 nm兩個(gè)波長(cháng)是目前ELISA測定常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動(dòng)轉換的部件,可以同時(shí)安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應包括上述兩個(gè)波長(cháng),有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個(gè)基本濾光片外,考慮到雙波長(cháng)比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長(cháng)的濾光片,其他濾光片可根據自己的需要選擇。有時(shí),有的實(shí)驗室希望用酶標儀作微量生化測定,故酶標儀生產(chǎn)廠(chǎng)家對其生產(chǎn)的酶標儀擴展了紫外檢測功能,此時(shí)需要一個(gè)340 nm波長(cháng)濾光片。此時(shí),酶標儀的測定波長(cháng)范圍就成為340—750nm或800nm。

     

    酶標儀有單波長(cháng)和雙波長(cháng)檢測功能。有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長(cháng)檢測。所謂的“單波長(cháng)”就是使用一種對顯色具大吸收的波長(cháng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測定;而“雙波長(cháng)”則除了用對顯色具大吸收的波長(cháng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測定外,同時(shí)用對特異顯色不敏感的波長(cháng)如630 nm進(jìn)行測定,酶標儀后打印出來(lái)的吸光度則為二者之差。630 nm波長(cháng)下得到的吸光度是非特異的,來(lái)自于板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,好使用雙波長(cháng),且不必設空白孔。

    測定的吸光度范圍


    通常,酶標儀的吸光度測定范圍在0~2.5之間即可以滿(mǎn)足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0~2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以上,并且能保持很好的度與線(xiàn)性。因此,對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,主要要看在一定的吸光度范圍內的線(xiàn)性和度如何。


    光學(xué)系統


    酶標儀的光學(xué)系統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導纖維,除測定通道外,有的酶標儀還有一個(gè)參比通道,每次測定可進(jìn)行自我校準。酶標儀的光學(xué)系統功能如何,均可通過(guò)酶標儀測定的吸光度范圍、線(xiàn)性度、度和準確度等體現出來(lái)。光學(xué)系統好的話(huà),則上述指標也應較佳。測定的度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

    檢測速度


    酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時(shí)間。檢測速度快,有利于提高檢測的度,即避免由于測定過(guò)程中,因測定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的酶標儀檢測速度都非???,通常在數秒鐘內。


    震板功能


    酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對其進(jìn)行振蕩混勻,使板孔內顏色均一。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的酶標儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節;有的則較為固定。使用有震板功能的酶標儀,在進(jìn)行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑后,可不必振蕩混勻,直接放人酶標儀上測定即可。


    溫育功能


    溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動(dòng)地控制儀器內部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過(guò)程可在儀器內部完成,而無(wú)需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標儀具有此種功能,溫育功能只是酶標儀的一個(gè)附加功能,是否具有并不能說(shuō)明酶標儀檔次的高低及儀器的優(yōu)劣。作為實(shí)驗室是否選擇,則可根據自己實(shí)驗室的條件及需要來(lái)決定。


    軟件功能


    軟件功能是指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標動(dòng)力學(xué)、紫外和凝集等數據的統計分析并報告結果的功能。軟件功能是中高檔酶標儀的一個(gè)非常重要的功能。如果硬件方面區別不大,則軟件就成為判定酶標儀優(yōu)劣的惟一指標。對于用戶(hù)來(lái)說(shuō),好的軟件功能,對實(shí)際工作會(huì )有較大的幫助。ELISA定性測定,酶標儀如具有陽(yáng)性判斷值(cut-off)及其測定“灰區”(即指測定吸光度處于cut—off周?chē)囊欢▍^域,此區域內結果應為“可疑”)的統計計算功能,不但方便了實(shí)驗室工作人員,而且在某些特定的情況下,有很高的實(shí)用價(jià)值。因此,如目的是定量測定,則在酶標儀的軟件功能中,好要有這種曲線(xiàn)回歸方程計算分析功能。其他諸如連點(diǎn)、直線(xiàn)等回歸計算,則可根據酶標儀的應用目的而定,如兼用于微量生化測定,則此類(lèi)回歸計算就很有必要。

    此外,酶標儀兼做酶標動(dòng)力學(xué)、凝集反應測定所需的軟件是否應具備,當然也應根據使用目的而定。由于此類(lèi)軟件一般都較為昂貴,酶標儀常另外單獨按需配備,如果不是實(shí)驗室特殊需要,就不必強求這種軟件功能。 


    語(yǔ)言界面


    通常進(jìn)口的中高檔酶標儀人機對話(huà)多采用英文。這對于某些基層實(shí)驗室可能會(huì )存在語(yǔ)言方面的困難,從而難以大限度地發(fā)揮酶標儀的作用。為解決這方面的問(wèn)題,已有一些酶標儀采用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實(shí)驗室技術(shù)人員的使用。

    綜上所述,盡管酶標儀的發(fā)展極為快速,種類(lèi)繁多,功能也不斷加強,但其根本的功用是不變的,即比色測定。大凡比色測定,其基本要求就是在一定吸光度范圍內要有好的測定準確性、線(xiàn)性和性。同樣的吸光度范圍,測定的準確性、線(xiàn)性和性越好則酶標儀亦越佳。

    而且,由于用于酶標儀比色測定的為多孔(通常為96孔)微孔板條,為保證測定的孔間重復性,則測定速度也是一個(gè)較重要的性能指標。至于其他如震板、溫育及有關(guān)的軟件功能,則是選配功能,不影響酶標儀其他的使用性能。


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